食品检验中的菌种保藏方法

摘要：综述了食品检验中常用的菌种保藏方法，包括定期移植保藏法、液体石蜡保藏法、载体保藏法、 低温保藏法和冷冻千燥保藏法，旨在为食源性致病菌菌种的保藏提供参考。

【食品检验中的菌种保藏方法分类】

1、定期移植保藏法

2、液体石蜡保藏法

3、载体保藏法

4、低温保藏法

5、冷冻干燥保藏法

【食品检验中的菌种保藏方法解析】

定期移植保藏法

此方法比较适用于传代菌株的保存，根据接种和培养方式的不同分为斜面培养、穿刺培养 和瘤肉基培养等。

斜面培养和穿刺培养一般适用于对营养要求不高的细菌，后者还常用于厌氧或兼性庆氧细菌的培养及保存;痞肉基培养法用于保存产气英膜梭菌等专性厌氧细菌，培养后往往用固体石 蜡封住试管口形成厌氧环境，转接时加热石蜡部位融化后取菌。

该类方法操作简单，对设备要求不高，通常置于普通冰箱内4℃保存即可，是实验室 菌种保藏比较常用的方法。其缺点是保存时间较短， 一般1-3个月需要转种一次，所以多用于工作或传代菌种的保存。

液体石蜡保藏法

液体石蜡保藏法又称作矿物油保藏法，为定期保藏法的辅助方法。在斜面或穿刺培养物表面 芸灭菌后的液体石蜡，以减少培养基中水分的蒸发和 阻止氧气进入，从而达到长期保藏的目的。

石蜡量以高出斜面顶端 1 cm 或高出半固体培养基5 cm 为宜，通常置于4℃条件下保存。保存过程中如石蜡挥发导致液面降低需及时补充无菌石蜡。

石蜡保藏法同样也适用于大多数普通营养要求的细菌，如金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、志贺氏 言 门氏菌、蜡样芽胞杆菌等。该方法一般可保 存菌种 1 a 左右，部分芽抱菌种可保藏 2a 以上，其缺点是保存过程中试管直立放置，并且菌种 复苏过程中液体石蜡的易燃性会给操作带来不便。

载体保藏法

载体保藏法是指将微生物吸附在适当的载体中进行干燥保存。载体类型多样，常见的有沙土、滤纸、明胶片等。

沙土保藏法：是较古老的菌种保藏方式，较适用于产芽抱细菌的保存。将培养好的纯培养物用无菌、制成悬浮液，注人灭菌的沙土管中混合匀，或 素。 直接将培养物刮下接种于灭菌的沙土管中，使菌体 酣在沙土载体上，将管中水分抽干后熔封管口或置于干燥器中4℃～-6℃:或室温条件下进保存。 该方法针对芽抱保存效果很好，但不造用于营养细 胞的保存。

滤纸片保藏法：利用灭菌滤纸片刮取纯菌种后置于冻存管内，-20℃:封口低温保存。此方法简单实用，适用广泛， 一般保存时间能达到 2a。对于部分营养要求高的 细菌，可在冻存管中加人无菌脱脂牛奶，将滤纸片 浸人其中保存。高颖等利用中药肉汤作为滤纸片保 存液保存菌种获得了较好的效果。菌种复苏时可直 接将滤纸片贴于培养基表面，由滤纸片处划线活化。

明胶片保藏法：将纯菌株从斜面培养基上刮下，置于明胶营养混合液中，用石蜡滤纸片吸附上述菌悬液，真空干 燥后置于 4℃:条件下密封保存。复苏菌种时只需将明胶片接种于相应液体培养基中培养即可。该方法保存的菌种经 17 a-26 a 存活率仍能达到 98% 以 上，且操作简单。

低温保藏法

低温保藏法可分为普通低温保藏和低温保藏，前者一般将菌种保存于 -20℃~30℃:条件 下，后者置于 -50℃:或更低温度环境中保藏，如液 氮保藏温度可低至 -196℃:。

在低温保藏中往往需 要在制备的细胞悬液中添加适当的保护剂，通过保护性溶质的氢键和离子键对水和细胞所产生的亲和 力来稳定细胞成分的构型，以防止因细胞内自由水凝结成冰晶对细胞造成损害。甘油和二甲亚枫是比较常用的保护剂。

据报道，牛乳、血清、糖类，甚至 部分中药成分都可作为冻存细菌的保护剂。需要注 意的是，保存前的细菌悬液含有足够活力的细 菌，并且保存后的菌种在使用过程中不可反复冻 融。

该方法保存细菌有效期较长，菌种在低于-70℃条件下可以长期保存，但在保存过程中需配 套低温冰箱或液氮装置，这在部分基层检验机构 较难实现。

冷冻干燥保藏法

冷冻干燥保藏法是现今可靠的菌种保藏 方法之一，也是菌种保藏机构较常使用的保藏方 法，其原理是将细菌在保护剂中冷冻， 在真空减压 情况下利用升华原理除去水分， 使细胞在非剧烈条 件下处于干燥、缺氧状态，达到抑制其生理活动的 目的。在该过程中也需要使用各种保护剂以避免细 胞受到损伤。

Abadias 等的研究发现，蛋白和糖的 混合物在该过程中作为保护剂会更有效。该方法适 用于大部分细菌，保存期长，成活率高，且菌种性 状稳定;其缺点是需要冷冻干燥机等专用设备，并 且操作复杂，适用于机构的菌种保藏工作。

来源：惠合冷热缸